hrvatski

Prekomjerna ekspresija i biokemijska karakterizacija mutanata humane dipeptidil- peptidaze III iz zloćudnih tumora

Dipeptidil-peptidaze III (DPP III) su metalopeptidaze iz porodice M49 koje hidroliziraju dipeptide s N-kraja peptidnih supstrata veličine 3 do 10 aminokiselina. Fiziološka funkcija ove peptidaze nije još do kraja razjašnjena, ali pretpostavlja se da ljudska DPP III osim uloge u završnim koracima razgradnje peptida u stanici ima ulogu i u nekoliko patofizioloških procesa, uključujući razvitak raka. U cBioPortal bazi podataka nalaze se sekvencirani uzorci DNA izolirane iz ljudskih tumora te su nađene mutacije u kodirajućoj regiji gena za humanu DPP III. Odabrane su tri mutacije kako bi se ispitao učinak istih na biokemijska svojstva i aktivnost humane DPP III. Istraživanje se provodilo na mutantima humane DPP III: E451K, R638L i R638W koji su dobiveni ciljanom in vitro mutagenezom ekspresijskih plazmida. Nakon tog slijedila je ekspresija mutanata u bakteriji E. coli te njihova izolacija i pročišćavanje afinitetnom kromatografijom na Ni-NTA koloni. Mutanti su podvrgnuti raznim testovima aktivnosti i mjerenju kinetike te su analizirani nativnom elektroforezom i izoelektričnim fokusiranjem na gelu. Dobiveni parametri za mutante uspoređeni su s onima „divljeg“ tipa.

Dipeptidil-peptidaza III ; kinetika ; mutageneza ; mutanti ; razgradnja proteina ; tumori

nije evidentirano