hrvatski

Dijagnostika COVID-19: iskustva Referentnog centra Ministarstva zdravstva za virološku dijagnostiku infekcija dišnog sustava

Sredinom prosinca 2020. godine u Kini je zabilježeno grupiranje bolesnika s atipičnom virusnom pneumonijom nepoznate etiologije za koju je utvrđeno da je uzrokovana novim koronavirusom zoonotskog podrijetla (SARS-CoV-2), a bolest je nazvana COVID-19. S pojavom prvih slučajeva izvan Kine i laboratorij Nacionalnog centra za gripu, koji je dio Referentnog centra Ministarstva zdravstva za virološku dijagnostiku infekcija dišnog sustava u Hrvatskom zavodu za javno zdravstvo (HZJZ), započeo je s pripremama za uvođenje dijagnostike SARS- CoV-2. Prvo je uvedena izravna (lančana reakcija polimerazom s reverznom transkripcijom ; RT-PCR, te brzi testovi za detekciju antigena), a kasnije i neizravna dijagnostika (EIA/ELFA, test neutralizacije virusa ; VNT). Od početka epidemije u Hrvatskoj, u HZJZ-u je RT-PCR metodom testirano više od 110 000 uzoraka na SARS-CoV-2, od čega je 14 610 bilo pozitivnih. Dokaz prisutnosti virusa u uzorku RT-PCR-om još uvijek je metoda izbora za dokaz akutne infekcije. Međutim, za procjenu proširenosti infekcije u populaciji jako je važno provesti serološka testiranja. Serologija je važna i kao dodatna metoda za potvrdu klinički jasnih slučajeva s negativnim RT-PCR nalazom na COVID-19 u osoba koje su bliski kontakti oboljelih. Validacijom više vrsta brzih imunokromatografskih antigenih testova (engl. Rapid antigen test ; RAT) utvrđeno je da značajan broj RAT-ova (poput Abbott, Ecotest, Biosensor, Biosynex, Humasis) ima visoku osjetljivost (>90%) kod uzoraka kojima je RT-PCR-om SARS-CoV-2 zabilježen do 25 ciklusa amplifikacije. Učinjena je usporedba deset seroloških testova za dijagnostiku SARS-CoV-2: pet 'Point-of care' (POC) imunokromatografskih testova (ACRO, AMP, ENCODE, NG BIOTECH i WIZ BIOTECH), četiri imunoenzimska testa (EIA ; DiaPro, Vircell ; Euroimmun i NovaTec) te imunoenzimskog testa s fluorescentnom detekcijom (ELFA ; Mini Vidas). EIA testovi su pokazali veću osjetljivost detekcije IgM/IgA protutijela u usporedbi s POC testovima, dok je osjetljivost detekcije IgG protutijela bila podjednaka u POC i EIA testovima. Budući da je test neutralizacije virusa (VNT) još uvijek zlatni standard za potvrdu seroloških testova, izoliran je SARS-CoV-2. Virus je uzgojen u staničnoj kulturi na Vero E6 stanicama iz nazofaringealnog obriska COVID-19 bolesnika u BSL-3 uvjetima (biozaštitni laboratorij 3. kategorije). Početno reaktivni serološki rezultati dodatno su provjereni mikro-neutralizacijskim testom (mVNT). Također je testiran i surogat VNT (GENSCRIPT SARS-CoV-2 Surrogate Virus Neutralisation ELISA) koji je pokazao značajno nižu osjetljivost u uzorcima s niskim titrom neutralizacijskih protutijela detektiranih klasičnim mVNT-om (8 i 16). Analizirana je i prisutnost SARS-CoV-2 u okolini COVID-19 bolesnika kako bi se procijenio obim prisutnosti virusa u okolišu oboljelih. SARS-CoV-2 RNA dokazana je u 3/41 (7, 3%) okolišnih uzoraka (mobitel, upravljač igrače konzole, prozorska kvaka).

COVID-19 ; dijagnostika ; Hrvatska

nije evidentirano