hrvatski

Uloga proteina IqgC porodice RasGAP u staničnoj adheziji

Pravilna adhezija eukariotskih stanica je nužna za odvijanje fundamentalnih staničnih procesa, kao što su migracija, fagocitoza i diferencijacija. Na ventralnom dijelu stanice Dictyostelium discoideum koja se kreće moguće je mikroskopijski razlikovati dvije vrste stacionarnih struktura. Jedno su strukture koje se obično naziva fokalnim adhezijskim strukturama te sadrže razne homologe proteina sisavaca uključenih u nastanak fokalnih adhezija, kao što su paxilin, talin, Rap1 i drugi. Druga vrsta sličnih struktura su akumulacije filamentoznog (F-) aktina koje se povezuju sa silama trakcije. Protein IqgC spada u porodicu proteina RasGAP te inaktivira malu GTPazu RasG u D. discoideum stimulacijom hidrolize GTP-a vezanog za aktivni oblik GTPaze. Nedavnim istraživanjem smo pokazali kako IqgC ima važnu ulogu u regulaciji endocitoze na velikoj skali. Tijekom uzgoja stanica deficijentnih za protein IqgC primijetili smo da se stanice lagano ispiru s plastične površine petrijevih zdjelica, što je bila indikacija da je IqgC uključen u regulaciju adhezije stanica za supstrat. Usporedili smo snagu adhezije stanica divljeg tipa i IqgC-deficijentnim stanica ekperimentima rotacijske trešnje i potvrdili da stanice deficijentne za IqgC imaju defekt u ovom procesu, što se može poništiti ponovnom ekspresijom rekombinantnog IqgC-a. Mikroskopijom tamnog polja smo pokazali da slabije adhezivne IqgCdeficijentne stanice migriraju brže nego divlji tip. Mikroskopija TIRF (totalna interna refleksija fluorescencije) sa stanicama koje simultano eksprimiraju fluorescentno obilježeni IqgC i paxilin B ili probu za F-aktin potvrdila je da IqgC lokalizira u adhezijske točke. Signalni putevi uključeni u regulaciju stanične adhezije u D. discoideum još uvijek nisu u potpunosti razjašnjeni, ali smatra se da je jedan od glavnih regulatora mala GTPaza Rap1. Taj protein smo pronašli u interaktomu proteina IqgC, kao jedan od potencijalnih veznih partnera. Nadalje, koristeći tehnike pull-down i BiFC (bimolekularna komplementacija fluorescencije) potvrdili smo interakciju proteina IqgC i Rap1. Ovim istraživanjem pokazujemo da je IqgC pozitivni regulator adhezije stanice za supstrat po kojem se kreće u amebi Dictyostelium discoideum. S obzirom na rezultate eksperimenata, predlažemo da IqgC regulira adheziju vezanjem za malu GTPazu Rap1.

IqgC ; RasGAP ; stanična adhezija ; Dictyostelium

nije evidentirano