hrvatski

Uloga enzima RecBCD i drugih nukleaza u CRISPR- Cas naivnoj adaptaciji u bakteriji Escherichia coli

Sustav CRISPR-Cas je obrambeni mehanizam bakterija od stranih genetičkih elemenata. Za pružanje zaštite je neophodna ugradnja fragmenta strane molekule DNA (razmaknice) u lokus CRISPR. Ugradnja nove razmaknice se naziva naivnom adaptacijom, a za ugradnju je neophodan proteinski kompleks Cas1-Cas2. Nije poznato kako nastaju fragmenti za ugradnju, no smatra se da bitnu ulogu ima nukleazna aktivnost enzima RecBCD. U ovom radu je detaljnije istražena uloga enzima RecBCD i drugih egzonukleaza u naivnoj adaptaciji. Praćenjem učinkovitosti adaptacije in vivo u sojevima E. coli mutiranim za istraživane gene je pokazano da nukleazna aktivnost enzima RecBCD nije neophodna, već samo helikazna, te da nastajanje 5'-stršećih krajeva DNA pomoću egzonukleaza pomaže adaptaciju. Utvrđeno je in vitro da kompleks Cas1-Cas2 može cijepati DNA s 5'-stršećim krajevima, a sekvenciranjem je utvrđeno da većina ugrađenih razmaknica potječe s kromosoma. Rezultati potvrđuju ulogu enzima RecBCD u stvaranju fragmenata DNA, a sam proces adaptacije ne utječe na vijabilnost.

E. coli ; CRISPR-Cas ; naivna adaptacija ; Cas1-Cas2 ; RecBCD ; rekombinacija

nije evidentirano