hrvatski

Određivanje uspješnosti genskog ciljanja u kvascu Kluyveromyces marxianus

Kvasac Kluyveromyces marxianus termotolerantni je kvasac zanimljivih fizioloških svojstva zbog čega je interesantan i kao radni mikroorganizam za brojne biotehnološke procese. U ovome radu, određena je uspješnost genskog ciljanja u konstruiranom soju kvasca K. marxianus. U prvom koraku ovaj kvasac transformiran je linearnim fragmentom NatBAV koji sadrži selektivni biljeg coNat odgovoran za rezistenciju na antibiotik nurserotricin, a čija je integracija u genom potvrđena hibridizacijom po Southern-u. U drugom koraku soj koji je u genomu sadržavao fragment NatBAV, transformiran je linearnim fragmentom HygBAV koji sadrži gen coHyg odgovoran za rezistenciju na antibiotik higromicin, a s obje strane selektivnog biljega nalazile su se regije homologne fragmentu NatBAV. Kao rezultat uspješnog genskog ciljanja dolazi do zamjene genomske regije sekvencom na transformirajućoj DNA procesom homologne rekombinacije. Nakon selekcije na podlozi s antibiotikom higromicinom, dobiveni transformanti replicirani su na podlogu s nurserotricinom te je u 70 % transformanata utvrđena zamjena gena coNat genom coHyg. Ova uspješnost je postignuta s relativno dugim bočnim homologijama (1, 4 i 2, 5 kb), a na temelju rezultata je ustanovljeno da je gensko ciljanje u kvascu K. marxianus znatno uspješnije nego u većini drugih vrsta nekonvencionalnih kvasaca.

Kluyveromyces marxianus ; gensko ciljanje ; transformacija ; homologna rekombinacija

nije evidentirano