hrvatski

Karakterizacija i validacija sojeva stanične linije melanoma dobivenih ugradnjom sekvence SHH u genom

U okviru ovog diplomskog rada identificirana je stanična linija dobivena ugradnjom sintetske sekvence koja kodira za protein sonic hedgehog. Aktivni oblik proteina sonic hedgehog, SHH-N, odgovoran je za autokrinu i parakrinu aktivaciju signalnog puta vezanjem za transmembranski receptor Patched 1. Provođenjem signala u stanicu, aktivacijski oblici transkripcijskih faktora glioma associated oncogenes ulaze u jezgru i aktiviraju transkripciju gena koji sudjeluju u ovom signalnom putu. Glavna uloga ovog signalnog puta je u organizaciji polarnosti organizma tijekom embriogeneze, dok je u odraslom organizmu većinom inaktivan, osim tijekom proliferacije i diferencijacije stanica. Zbog činjenice da regulira rast i razvoj, promjene u ovom signalnom putu mogu dovesti do nastanka tumora, poticanja njihovog rasta i invazije. Iz pojedinačnih transfeciranih stanica uspostavljene su klonske stanične linije kojima je pomoću PCR-a testirana prisutnost inserta SHH u genomu, ekspresija proteina SHH i SHH-N. Na temelju tih rezultata izabrane su četiri linije kojima su westernskom metodom otiska i imunofluorescencijom analizirane količine proteina HH/GLI signalnog puta (PTCH1, GLI1, GLI2, GLI3) i markera EMT (vimentin, E- kadherin). Identifikacijom prikladne stanične linije koja stabilno eksprimira SHH-N bit će moguće daljnje istraživanje ovog signalnog puta, osobito u stanicama tumora.

Hedgehog-GLI ; CHL-1 ; melanom ; transfekcija

nije evidentirano