hrvatski

Konstrukcija vektora za ekspresiju proteina SHH u staničnoj liniji melanoma čovjeka CHL-1

U današnje vrijeme, melanom se smatra jednim od najsmrtonosnijih tipova tumora sa sve većom učestalosti u populaciji. Uslijed izuzetno složene patogeneze bolesti, koja je povezana sa promjenama u jednom ili više signalnih puteva, istraživanja se usmjeravaju prema razvoju kombiniranih inhibitora kao potencijalne terapije. U ovom istraživanju dizajniran je vektor za prolaznu i stabilnu ekspresiju proteina SHH u staničnoj liniji melanoma čovjeka CHL-1. Aktivni oblik proteina SHH djeluje kao ligand koji se veže za transmembranski receptor Patched i pokreće signalni put Hedgehog-Gli. Ključna uloga signalnog puta HH-GLI je regulacija embriogeneze, dok se poremećena funkcija istog povezuje s inicijacijom, progresijom, invazijom i preživljenjem tumora. Kloniranjem dizajniranog sintetskog genskog fragmenta gBlock SHH u ekspresijski vektor pcDNA3 uspješno je eksprimiran aktivni oblik proteina SHH-N. Westernskom metodom otiska dokazano je da prolazna transfekcija stanične linije melanoma CHL-1 vektorom pcDNA3.1 - SHH dovodi do povećanja ekspresije gena SHH i autokrine aktivacije signalnog puta HH-GLI ovisne o ligandu, što potvrđuje povećana proteinska ekspresija SHH-N, PTCH1, transkripcijskog faktora GLI1 i GLI3R te smanjenje razine ekspresije proteina GLI3FL, 48 sati nakon transfekcije. Isto tako, ekspresija proteina SHH stimulirala je aktivaciju signalnih puteva PI3K i MAPK, no nije pokazala učinak na regulaciju staničnog ciklusa. Važnost dokazane interakcije je izuzetno velika i predstavlja temelj razvoja modela za istraživanje terapija u liječenju melanoma.

signalni put HH-GLI ; Sonic Hedgehog ; kloniranje ; melanom ; transfekcija ; PI3K/AKT ; MAPK

nije evidentirano