hrvatski

Kinetička karakterizacija homologno nadeksprimiranih izoleucil-tRNA- sintetaza iz bakterije Bacillus megaterium

Izoleucil–tRNA–sintetaze (IleRS) su enzimi koji u dva koraka kataliziraju nastajanje kovalentne veze između izoleucina (Ile) i pripadne molekule tRNAIle u procesu biosinteze proteina. U prvom koraku, koji se naziva aktivacija, nastaje izoleucil–adenilat dok se u drugom koraku aktivirana aminokiselina prenosi na molekulu tRNAIle. Postoje dva tipa IleRS koji se razlikuju po strukturnim karakteristikama i rezistenciji na antibiotik mupirocin. Genom bakterije Bacillus megaterium neuobičajeno sadrži gene za oba tipa IleRS, što čini navedene proteine zanimljivim za istraživanje. U sklopu ovog rada, proteini IleRS1 i IleRS2 dobiveni su homolognom nadekspresijom u bakteriji B. megaterium te pročišćeni afinitetnom kromatografijom. Molekula tRNAIle heterologno je nadeksprimirana u bakteriji Escherichia coli i pročišćena kromatografijom obrnutih faza. Kinetička karakterizacija navedenih enzima je pokazala da u aktivaciji IleRS2 ima oko 25 × veći KM (Ile) od IleRS1. Međutim, u ukupnoj reakciji aminoacilacije, koja uključuje i molekulu tRNA, dolazi do znatne promjene KM (Ile) za oba enzima što rezultira većim KM (Ile) za IleRS1 u odnosu na IleRS2. To sugerira da interakcija s tRNA različito utječe na mehanistička svojstva IleRS1 i IleRS2.

aktivacija aminokiseline, bakterija Bacillus megaterium, izoleucil-tRNA-sintetaze, kromatografija obrnutih faza, tRNAIle, ukupna aminoacilacija

nije evidentirano