hrvatski

Usporedba metoda za određivanje ekspresije fotosintetskih proteina

Fotosinteza je biološki važan proces koji se odvija u kloroplastima. Naizgled jednostavan proces u kojem dolazi do stvaranja ugljikohidrata i kisika iz vode i ugljikova dioksida, zapravo je niz oksidacijsko- redukcijskih reakcija potpomognutih svjetlošću za čije su uspješno odvijanje zaslužni brojni proteinski kompleksi. Jedan od najvažnijih proteinskih kompleksa je fotosustav II (PSII), koji je i mjesto inicijacije fotosintetskih reakcija na svjetlu. Njegove najvažnije komponente su antena kompleks i reakcijsko središte (građeno od D1 i D2 proteina) te kompleks za razvijanje kisika (OEC) na čijoj vanjskoj strani se nalaze tri male proteinske podjedinice: PsbO, PsbP i PsbQ. U reakcijama neovisnim o svjetlosti (Calvinov ciklus) nastaju organske molekule iz CO2, a prvi korak (fiksaciju CO2) katalizira enzim Rubisco. Cilj našeg istraživanja bio je usporediti metode za određivanje ekspresije fotosintetskih proteina: D1, PsbO podjedinice OEC-a i velike podjedinice Rubisca. Proteini su izdvojeni iz biljnog materijala pomoću dvije različite metode: metodom izolacije ukupnih proteina i metodom izolacije proteina iz kloroplasta. Odvojeni su prema molekulskoj masi (SDS-PAGE) i detektirani imunodetekcijom (Western blot). Proteinske vrpce dobivene su na filmu pomoću metode kemiluminiscencije. Usporedbom proteinskih vrpci dviju metoda, određena je pogodnija metoda za određivanje ekspresije pojedinih fotosintetskih proteina.

Elektroforeza ; Fotosinteza ; Fotosintetski proteini ; Imunodetekcija

nije evidentirano