hrvatski

Izazovi bioanalitike tiopurina i endogenog folata u eritrocitima, plazmi i urinu - razvoj HPLC-DAD-FLD metode za terapijsko praćenje lijekova

Bioanalitika i terapijsko praćenje lijekova područja su izrazito prožeta problematikom koja se stalnim napretkom znanosti rješava, bilo da se radi o zdravstvenom, analitičkom ili financijskom aspektu. Cilj ovog istraživanja bio je postavljanje temelja analitičkoj HPLC metodi koja bi kvantificirala 5-MTHF u plazmi, odnosno tiopurine u eritrocitima i urinu, istovremeno obraćajući pozornost na što jednostavniju praktičnu primjenjivost i vjerodostojnost njezinih rezultata. Kao uzorci plazme za analizu 5-MTHF korišteni su uzorci zdravog dobrovoljca, a kao uzorci eritrocita korišteni su uzorci zdravog dobrovoljca obogaćeni tiopurinskim metabolitima u očekivanim koncentracijama. Kao uzorak urina upotrijebljen je umjetni urin obogaćen tiopurinskim metabolitima. Razvijena je HPLC- DAD-FLD metoda vremena trajanja 18 minuta. Od većeg broja ispitanih ekstrakcijskih tehnika, kao optimalna metoda pripreme uzorka plazme pokazala se predobradba ekstrakcijom na čvrstoj fazi, uz perklornu kiselinu kao taložni reagens. Nakon optimizacije količine antioksidansa ditiotreitola i vremena zagrijavanja uzoraka na 100 °C u blok-grijaču, eritrociti su obrađeni pri optimalnim uvjetima te analizirani HPLC metodom. Uzorak urina uključivao je jednostavan korak taloženja proteina pomoću perklorne kiseline te razrjeđenja. Važan zahtjev selektivnosti za ovu metodu je zadovoljen. Ispitani su validacijski parametri linearnosti, točnosti i ponovljivosti za metodu analize tiopurinskih metabolita u eritrocitima. Pri ispitivanju linearnosti, koeficijent korelacije je u svih analita iznosio preko 0, 989, a donja granica kvantifikacije metode bila je reda veličine 10- 100 ng/mL. Kod ispitivanja točnosti analitički prinosi analita iznosili su između 90, 29 % i 114, 6 %. Ponovljivost metode nije prelazila vrijednost relativne standardne devijacije od 14, 81 %, osim u slučaju 6-MP. Unatoč zahtjevnosti predobradbe i analize bioloških uzoraka, razvijena je kratkotrajna, selektivna i ponovljiva bioanalitička metoda sa zadovoljavajućim prinosom kod svih očekivanih analita.

bioanalitika ; terapijsko praćenje lijekova ; tekućinska kromatografija visoke djelotvornosti ; 5-metiltetrahidrofolat ; azatioprin

Studentski rad izrađen je pod mentorstvom prof. dr. sc. Ane Mornar Turk i neposrednim mentorstvom Edvina Brusača, mag. pharm., te nagrađen Rektorovom nagradom u ak.god. 2019./2020.