hrvatski

Dokaz i molekularna tipizacija sojeva reovirusa izdvojenih u roditeljskom jatu teške linije peradi

Ptičji reovirusi su ubikvitarni mikroorganizmi u domaće peradi i ostalih ptičjih vrsta, te se često izdvajaju i u zdrave i u bolesne peradi iz gastrointestinalnog i respiratornog trakta. Oni se mogu širiti vertikalno i horizontalno feko – oralnim i respiratornim putem. Između sojeva postoje značajne razlike s obzirom na sposobnost horizontalnog načina širenja. Virusni artritis – tenosinovitis je najteža klinička i gospodarska bolest uzrokovana reovirusima, a opisana je u kokoši, prvenstveno tovnih pilića, i purana. Virusni artritis – tenosinovitis može se dijagnosticirati na temelju kliničke slike, makroskopskih i mikroskopskih promjena, ali za definitivnu dijagnozu potrebno je izolirati i identificirati reovirus. Molekularna metoda RT–PCR danas se koristi kao univerzalna metoda za identifikaciju ptičjih reovirusa. Serološki se reovirusni antigen može utvrditi u smrznutim uzorcima tetivnih ovojnica ili drugih tkiva pomoću fluorescentnih protutijela. Komercijalni ELISA testovi koriste se za procjenu razine reovirusnih protutijela unutar jata. Zbog ubikvitarnosti reovirusa i modernog, intenzivnog načina peradarske proizvodnje teško je održavati jata slobodna od reovirusa. Na tržištu su prisutna komercijalna cjepiva za rasplodne kokoši, koja osiguravaju dostatnu zaštitu, ali zbog varijabilnosti sojeva ni roditelji ni potomstvo nisu uvijek potpuno zaštićeni, te stoga postoji potreba za primjenom autogenih cjepiva protiv lokalnih sojeva. Svrha ovog istraživanja bila je provesti monitoring na roditeljskoj farmi teške linije peradi, na kojoj je već serološki dokazana prisutnost reovirusa koristeći molekularnu metodu qPCR. Iz uzoraka crijeva pilića, membrana i ovojnica kokoši prethodnog jata, te korioalantoisne membrane SPF zametaka nakon inokulacije uzoraka tetiva i ovojnica ovog jata dobi 14 tjedana, izdvojena je ukupna DNK/RNK, te je do daljnje analize čuvana na -80°C. Za preliminarni dokaz reovirusa u uzorku korištena je qPCR metoda kao vrlo osjetljiva i specifična primjenom početnica i Taqman probe. Rezultati qPCR reakcije pokazali su prisustvo virusa u 3 od 16 uzorka crijeva pilića, no uzorci tetiva i membrana od klinički manifesnih jedinki prethodnog jata bili su negativni. Analizom pozitivnih uzoraka crijeva pilića klasičnom PCR reakcijom dobili smo negativne rezultate. Nakon inokulacije na zametke došlo je do uginuća dva od pet zametka 3. i 4. dan od inokulacije, no i navedeni i uzorci korioalantoisne membrane ostalih inokuliranih zametaka su qPCR analizom bili negativni. Poznato je da u gotovo u 100% slučajeva izostaje dokaz virusa klasičnim PCR postupkom. Smatra se da je najprije potrebno virus umnožiti u SPF zametcima, a potom dokazati klasičnom PCR reakcijom. U našem slučaju negativni nalaz qPCR reakcije nakon umnažanja na SPF zamecima vjerojatno je rezultat uznapredovalog stadija bolesti u kojim je došlo do iščezavanja virusa iz područja promjena. Sukladno rezultatima potrebno je monitoring provesti kroz duži period, osobito prije očekivane pojave simptoma, uz obveznu inokulaciju na zametke. Dobiveni rezultati omogućili bi izradu autogenih cjepiva kojim bi unaprijedili imunoprofilaksu na farmi, a protokol bi se koristio i za kontrolu reovirusa na drugim farmama.

ptičji reovirusi, virusni arteritis-tenosinovitis, qPCR, teška linija kokoši

nije evidentirano