hrvatski

Imunohematološko ispitivanje za dijagnostiku hladne paroksizmalne hemoglobinemije

Cilj: Paroksizmalna hladna hemoglobinurija (PCH, eng. Paroxysmal cold hemoglobinuria) je rijetka (1–2%) autoimuna hemolitička anemija (AIHA) karakterizirana naglom intravaskularnom hemolizom, hemoglobinurijom i anemijom. Dijagnostika PCH je izuzetno složena, gdje osim rezultata imunohematološkog ispitivanja treba uzeti u obzir kliničku sliku pacijenta i laboratorijske pokazatelje. Cilj rada je prikazati imunohematološke testove za dokazivanje IgG autoprotutijela koja djeluju kao bifazični hemolizini jer na nižim temperaturama aktiviraju komplement, a na višim temperaturama uzrokuju hemolizu. Metode: Na Odjel za transfuzijsku medicinu, Kliničkog zavoda za transfuzijsku medicinu i transplantacijsku biologiju, KBC Zagreb, upućena su tri pacijenata pod sumnjom na AIHA-u kod kojih je imunohematološkim ispitivanjem dokazana ili je postavljena sumnja na PCH. Za određivanje direktnog antiglobulinskog testa (DAT) korištene su IgG-C3d-ctrl (DC-Screening II, Bio-Rad) i IgG-IgA-IgM-C3c- C3d-ctrl (DC-Screening I, Bio-Rad) mikrokartice. Za eluciju antieritrocitnih protutijela korišten je set za kiselu eluciju (DiaCidel, Bio-Rad). Za pretraživanje antieritrocitnih protutijela (IAT) korišten je trostanični panel test eritrocita (BioVue Screen, Ortho). Specifi čnost antieritrocitnih protutijela određena je s jedanaeststaničnim panelom (ID-DiaPanel/ID- DiaPanelP, Bio-Rad ; Panel C, Ortho) tehnikom u mikrokartici, odnosno u epruveti (Panel A, Ortho). Za određivanje temperaturnog raspona antieritrocitnih protutijela na 37 ºC, 30 ºC, 20 ºC i 4 ºC i titra na 4 ºC korišten je pool „I“ test eritrocita. Za potvrdu PCH rađen je Donath- Landsteinerov test na 0 ºC i 37 ºC, uz primjenu svježeg seruma zdravog davatelja kao izvora komplementa i test eritrocita davatelja fenotipa P1 krvne grupe „O“. Rezultati: Radi sprečavanja autoadsorbcije hladnih protutijela uzorci su prije obrade tj. odvajanja seruma od eritrocita, transportirani i pohranjeni na 37 ºC. Na eritrocitima svih pacijenata dobivene su pozitivne reakcije samo s anti-C3d (1+ do 3+). Eluat je bio negativan kod jednog pacijenta, kod drugog pozitivan, a kod trećeg nije rađen. IAT je bio negativan kod dva pacijenta, a kod jednog pozitivan. Određivanje titra i temperaturnog raspona pokazalo je da antieritrocitna protutijela u sva tri pacijenta optimalno reagiraju na 4 °C. Također su slabo reagirala na 20 °C i 30 °C. Titar na 4 °C je bio nizak (1:5 do 1:40). Kod jednog pacijenta određena specifi čnost autoprotutijela bila je anti-P1 (fenotip pacijenta P1), a kod drugih se nije mogla odrediti. Kod pacijenta s autoprotutijelom anti-P1 specifi čnosti, Donath-Landsteinerov test bio je pozitivan. Zaključak: Kod pacijenata s PCH, tijekom ili neposredno nakon akutne faze bolesti, DAT-C3d je pozitivan. U kasnijoj fazi bolesti, DAT kao i Donat-Landstainerov test, može biti negativan zbog potrošnje autoprotutijela za vrijeme nagle hemolize. IAT je obično negativan, a u serumu su najčešće prisutna hladna autoprotutijela specifi čnosti anti-P1 ili hladna nespecifi čna protutijela u niskom titru. Budući da je Donat- Landsteinerov test niske osjetljivosti, negativnim testom ne može se isključiti PCH ukoliko se prema kliničkim i laboratorijskim pokazateljima postavi sumnja na ovu bolest.

Imunohematološko ispitivanje ; Dijagnostika hladne paroksizmalne hemoglobinurije

nije evidentirano