hrvatski

Izolacija lipidnih splavi prije i nakon procesa mijelinizacije u mozgu genetički izmijenjenog miša St8sia1

Ciljevi istraživanja: Izolirati lipidne splavi i utvrditi njihov sastav koristeći biokemijsku izolaciju splavi na miševima prije procesa mijelinizacije, tijekom i nakon njega (pet, 15 i 30 dana starosti) te uporabom specifičnih protutijela potvrditi uspješnu izolaciju splavi i usporediti razlike u mijelinizaciji među prethodno navedenim starosnim skupinama u moždanom deblu miševa s isključenim genom St8Sia1 s nedostatkom u sintezi kompleksnih gangliozida ; odnosno utvrditi kako nedostatak istih utječe na organizaciju mijelinskih mikrodomena, a time i na održavanje njegova integriteta. Materijali i metode: U istraživanju su korišteni KO miševi St8Sia1 stari pet, 15 i 30 dana s nedostatkom u sintezi kompleksnih gangliozida b – serije, što je dokazano genotipizacijom pomoću specifičnih početnica. Po još neobjavljenom protokolu izolirati lipidne splavi i uzorke najzad frakcionirati. Odrediti koncentracije proteina prema Bradfordu potrebnih za Western blot analizu. Elektroforezom odvojiti proteine te ih prenijeti na membrane. Korištenjem primarnih i sekundarnih protutijela odrediti izražaj na markere flotilina i transferina, tj. markere splavi, odnosno ne-splavi te na mijelinu pridruženi glikoprotein (MAG) i mijelinski bazični protein (MBP), markere mijelinizacije. Membrane vizualizirati i slikati, a dobivene rezultate analizirati denzitometrijski pomoću računalnog programa Fiji. Rezultati: Statistički značajnu razliku usporedbom svih triju starosnih skupina miševa pokazuju flotilin i transferin, dok MBP razliku pokazuje usporedbom miševa 15 i 30 dana starosti. Međutim, prva se dva biljega, neočekivano, nalaze u svim frakcijama umjesto u specifičnim frakcijama za navedene biljege. Zaključak: S obzirom na rezultate flotilina i transferina izgledno je da izolacija splavi nije bila potpuna te da su izolirane stanične membrane.

lipidne splavi ; mijelinizacija, St8Sia1

nije evidentirano