hrvatski

Unutarvakuolarni život Francisella novicida u Dictyostelium discoideum

Cilj istraživanja: Francisella novicida je unutarstanična bakterija koja može inficirati brojne stanice uključujući i stanice ameba. Pretpostavlja se da amebe imaju važnu ulogu za održavanje francizela u vodenom okolišu. Za razliku od stanica sisavaca gdje citosolnom razmnožavanju ove bakterije prethodi kratki ulazak u fagosom, u stanicama ameba bakterija se razmnožava u vakuoli. Postavljena je hipoteza da boravak bakterije u fagosomu/vakuoli i u stanicama makrofaga i u stanicama ameba, ima bitnu ulogu u unutarstaničnom životu bakterije, njenoj virulenciji i patogenezi tularemije. Zbog toga su ciljevi rada bili: uspostaviti okolišnu amebu Dictyostelium discoideum kao modelni organizam za proučavanje unutarstaničnog života F. novicida, razviti metodu za izolaciju fagosoma/vakuole u kojima se nalazi F. novicida iz stanica D. discoideum i primarnih stanica humanih makrofaga, kao i identificirati proteine uključene u formiranje vakuole u kojoj se nalazi F. novicida nakon infekcije D. discoideum. Materijal i metode: U ovom radu istražen je endosomalno – lizosomalni put F. novicida u D. discoideum metodama konfokalne i elektronske mikroskopije te Western blot analizom. U svrhu analize fagosoma/vakuole u kojima se nalazi F. novicida nakon infekcije stanica ameba i humanih makrofaga, uspostavljena je metoda za njihovu izolaciju. Identifikacija proteina koji su uključeni u sastav vakuole provedena je masenom spektrometrijom. Rezultati: Praćenjem kinetike rasta pokazano je da se F. novicida razmnožava u D. discoideum. Bakterija se nakon ulaska u amebu nalazi u ranom vakuolarnom odjeljku, gdje se i razmnožava. Uspostavljena je metoda za izolaciju fagosoma/vakuole u kojoj se nalazi F. novicida i njihove membrane su visoko očuvane. Kvantitativnom proteomskom analizom uzoraka frakcije vakuola u kojima se nalazi F. novicida izoliranih iz D. discoideum 30 minuta nakon infekcije identificirano je ukupno 974 proteina s visokom grupnom specifičnošću. Zaključak: Rezultati ovog istraživanja pokazali su da F. novicida raste i razmnožava se u D. discoideum te ameba može služiti kao modelni organizam za proučavanje virulencije vrsta Francisella i patogeneze tularemije. Bakterija se nakon infekcije razmnožava u vakuoli. Uspješno je uspostavljena metoda za izolaciju fagosoma/vakuole u kojoj se nalazi F. novicida nakon infekcije D. discoideum i humanih makrofaga. Masenom spektrometrijom identificirani su proteini rane vakuole endosomalno – lizosomalnog puta što dokazuje lokalizaciju bakterije u vakuoli.

Dictyostelium ; Fagosom ; Francisella ; Unutarstanični život

nije evidentirano