hrvatski

Usporedba različitih postupaka izolacije terapijskih imunoglobulina G iz hiperimune konjske plazme

Antivenomi su jedini učinkoviti lijekovi za tretiranje posljedica ugriza zmija otrovnica čija su djelatna tvar cjeloviti imunoglobulini G (IgG) ili njihovi fragmenti (Fab ili F(ab')2). Dobivaju se različitim postupcima pročišćavanja iz hiperimune životinjske plazme s ciljem odstranjenja preostalih komponenata plazme i smanjenja intenziteta neželjenih popratnih pojava nakon primjene ovih biofarmaceutika. Međutim, iako „pročišćeni“, IgG-i još uvijek povremeno izazivaju nuspojave koje se pripisuju zaostalim kontaminirajućim proteinima i/ili agregatima. Prema podacima u literaturi, pretpostavlja se da postupci pročišćavanja tijekom kojih su IgG molekule izložene nepovoljnim uvjetima, narušavaju njihov strukturni integritet čime im se smanjuje stabilnost i povećava sklonost agregaciji. Nasuprot tome, primjenom postupaka pročišćavanja u kojima se imunoglobulini održavaju cijelo vrijeme u otopini takvi nepovoljni učinci smanjuju se ili potpuno izostaju. Cilj ovog istraživanja bio je ispitati navedenu hipotezu usporedbom i karakterizacijom IgG pripravaka dobivenih primjenom sljedećih 5 postupaka pročišćavanja: taloženjem kaprilnom kiselinom (CA), taloženjem amonijevim sulfatom (AS), kromatografijom kationske izmjene (CEX), kromatografijom anionske izmjene (AEX) te afinitetnom kromatografijom (AFI). Dobivene IgG frakcije analizirane su obzirom na čistoću, stabilnost i promjene u sastavu IgG potklasa. Preparati najveće čistoće dobiveni su postupcima taloženja kaprilnom kiselinom i afinitetnom kromatografijom, dok su najviše agregata sadržavali preparati pročišćeni afinitetnom kromatografijom, kromatografijom kationske izmjene i taloženjem amonijevim sulfatom. Kontaminirajući proteini identificirani su spektrometrijom masa. Afinitetna kromatografija uzrokovala je najveće promjene u sastavu IgG potklasa s najvećim gubitkom IgG(T) potklase. Analizom stabilnosti preparata dobivene su podjednake vrijednosti temperatura taljenja (Tm) svih uzoraka osim nešto smanjene vrijednosti IgG-a pročišćenih afinitenom kromatografijom. Tm vrijednosti i udio agregata ostali su nepromijenjeni nakon mjesec dana pohrane na 37 °C. Dosadašnji rezultati pokazuju da se različitim postupcima pročišćavanja dobivaju IgG-i različite čistoće i sastava potklasa što bi moglo utjecati kako na sigurnost tako i na djelotvornost antivenoma. Međutim, povećanje agregacije ne mora nužno biti posljedica promjena u strukturi IgG-a nastalih tijekom pročišćavanja.

antivenom, IgG, pročišćavanje, stabilnost, agregati, potklase

nije evidentirano