hrvatski

Uspostava modela adipogeneze na mišjim 3T3-L1 preadipocitima

Ciljevi istraživanja: Odrediti koncentraciju stanica pri kojoj je diferencijacija preadipocita najučinkovitija, odrediti učinak različitih koncentracija lijekova za indukciju adipogeneze na učinkovitost diferencijacije preadipocita, te odrediti vremenski period potreban za maksimalnu diferencijaciju preadipocita u zrele adipocite. Nacrt studije: Istraživanje je provedeno kao randomizirani kontrolirani proces. Materijali i metode: 3T3 L1 stanična linija mišjih preadipocita uzgajana je u DMEM-u uz dodatak 10 % FBS i 1%-tne otopine antibiotika/antimikotika, na temperaturi od 37 °C, u vlažnom atmosferskom zraku s 5 % CO2. Nakon što su stanice uzgojene do potrebne konfluentnosti, izložene su različitim koncentracijama MDI, koktela za indukciju procesa adipogeneze. Rast stanica svakodnevno je praćen te su dobivene promjene zabilježene invertnim mikroskopom EVOSTM FL Color. U svrhu utvrđivanja napretka diferencijacije adipocita, korišteni su Trypan Blue bojanje, Oil Red O bojanje, MTT analiza i GSH test. Rezultati: Bojanjem Oil-Red-O utvrđeno je nakupljanje lipidnih kapljica unutar stanice, kojima se povećavao broj i volumen s napredovanjem adipogeneze. Broj diferenciranih stanica bio je manji u odnosu na broj nediferenciranih stanica, što je utvrđeno Trypan blue bojanjem koje je koreliralo s rezultatima MTT testa. Nadalje, rađen je GSH test, kojim smo dokazali kako se GSH smanjuje tijekom procesa adipogeneze, što je rezultat oksidacijskog stresa. Zaključak: Utvrđeno je kako nema razlike u učinkovitosi između različitih koncentracija agensa za indukciju diferencijacije preadipocita. Ispitivanjem adipogeneze na subkonfluentim i konfluentnim stanicama zaključeno je kako je diferencijacija učinkovitija na konfluentnim stanicama. Za najučinkovitiju diferencijaciju potrebno je stanice uzgajati prema protokolu kroz 12 dana.

pretilost ; adipogeneza ; 3T3-L1 stanice ; adipociti

nije evidentirano