hrvatski

Razvoj testa za mjerenje aktivnosti enzima lipaze porijeklom iz Thermomyces lanuginosus

Enzim lipaza katalizira hidrolizu u vodi netopivog estera p-nitrofenil palmitata (pNPP) u p- nitrofenol (pNP) na granicama faza (stabiliziranih emulgatorom) voda : organsko otapalo. U svrhu razvoja brzog i pouzdanog spektrofotometrijskog testa za mjerenje aktivnosti enzima lipaze porijeklom iz Thermomyces lanuginosus (TLL), u ovom radu ispitan je utjecaj pufera (pH = 7-10), 8 organskih otapala (acetonitril, metanol, izopropanol, etanol, 2-etoksietanol, DMSO, aceton i 1, 4-dioksan) i 11 emulgatora (Arapska Guma, PEG 4000, PEG 6000, Triton X-45, Triton X 100, SDS, CTAB, Tween 20, Tween 40, Tween 80 i Span 80) na aktivnost enzima lipaze. Hidrolitička aktivnost TLL mjerena je spektrofotometrijski kao dinamička promjena apsorbancije u vremenu pri valnoj duljini,  = 440 nm. Maksimalna aktivnost enzima lipaze postignuta je pri sljedećim procesnim uvjetima: a) pH = 9 (50 mmol dm-3 Tris-HCl pufer) ; b) volumni udio acetonitrila u reakcijskoj smjesi 4% (v/v) ; c) maseni udio Arapske Gume 0, 3% (w/v). Za opis brzine reakcije korištena su i uspoređena dva kinetička modela: Michaelis- Menteničin kinetički model i Hillov kinetički model. Iz kinetičkih podataka ovisnosti volumne aktivnosti enzima o početnoj koncentraciji supstrata nelinearnom regresijom su procijenjene parametri kinetičkih modela (Michaelis-Menteničin model: Km = 0, 173±0, 058 mmol dm-3, Vm = 266.593±26285 U cm-3 ; Hillov model: Km = 0, 173±0, 010 mmol dm-3, Vm = 222.781±9112 U cm-3). Potvrđeno je da se Michaelis-Menteničin kinetički model ne može koristiti za opis eksperimentalnih podataka hidrolize pNPP-a katalizirane enzimom lipaza porijeklom iz T. lanuginosus, odnosno da ove podatke bolje opisuje Hillov kinetički model.

lipaza ; test za mjerenje aktivnosti lipaze ; Hillov model

nije evidentirano