hrvatski

Djelovanje izvanstaničnog Hsp70 i ekstrakta dima cigareta na aktivaciju protein-kinaza aktiviranih mitogenom te na ekspresiju receptora 2 sličnog Tollu i unutarstaničnog Hsp70

Dim cigareta smatra se jednim od glavnih čimbenika u razvoju kronične opstrukcijske plućne bolesti (KOPB). Upalnom odgovoru pridonosi izvanstanični protein toplinskog šoka 70 (Hsp70) aktivacijom receptora 2 i 4 sličnih Tollu (TLR2 i TLR4), što dovodi do kaskadne aktivacije protein-kinaza aktiviranih mitogenom (MAPK), poput protein-kinaza reguliranih izvanstaničnim signalima (ERK) i p38. Suprotno tome, unutarstanični Hsp70 potiskuje upalni odgovor. Cilj ovog rada bio je ispitati utjecaj izvanstaničnog Hsp70, ekstrakta dima cigareta (CSE), lipopolisaharida (LPS) i lipoteikoične kiseline (LTA) na ekspresiju receptora TLR2 i TLR4 te unutarstaničnog Hsp70, kao i na aktivaciju MAPK u 16HBE i NHBE stanicama humanog bronhijalnog epitela. Citotoksičnost je ispitana MTS testom nakon 24 h tretiranja stanica. Aktivacija i ekspresija MAPK (ERK i p38) te ekspresija unutarstaničnog Hsp70 određena je Western blot tehnikom nakon 30 minuta, 2 i 8 sati tretiranja, dok je ekspresija receptora TLR2 određena kvantitativnom lančanom reakcijom polimeraze u stvarnom vremenu (qPCR) nakon 24 sata tretiranja. Rezultati pokazuju da CSE u nižim koncentracijama povećava vijabilnost 16HBE stanica, ali da je u višim koncentracijama smanjuje. Suprotno tome 15 % CSE povećao je vijabilnost NHBE stanica. Nadalje, u 16HBE stanicama ERK pokazuje aktivaciju nakon 30 minuta kod gotovo svih tretiranja, a nakon 8 sati se aktivira uz izlaganje nižoj koncentraciji CSE-a, LPS-u i LTA-u. CSE je u svim ispitivanim vremenima i koncentracijama doveo do povećane aktivacije p38, do čega je dovelo i 30-minutno izlaganje stanica LPS-u i LTA-u. Do smanjenja unutarstaničnog Hsp70 doveli su LPS i LTA, dok je CSE uglavnom povećavao njegovu ekspresiju. Na aktivaciju MAPK i ekspresiju Hsp70 u NHBE stanicama utjecao je samo 15 % CSE. U 16HBE stanicama LPS i LTA ne utječu značajno na mRNA ekspresiju receptora TLR2, dok je rhHsp70 smanjuje. S druge strane, rhHsp70 pokazuje sinergistički učinak s LPS-om i LTA-om na povećanje ekspresije mRNA za receptor TLR2 u odnosu na stanice tretirane samim LPS-om ili LTA-om. CSE povećava ekspresiju mRNA za receptor TLR2 u individualnim i u kombiniranim tretiranjima. Kombinirano tretiranje 15 % CSE-om i rhHsp70 pokazuje značajno smanjenje ekspresije mRNA za receptor TLR2. Ovo ukazuje na antagonistički učinak rhHsp70 i viših koncentracija CSE-a. U ovome istraživanju potvrđeno je citotoksično djelovanje viših koncentracija CSE-a, dok bi niže koncentracije CSE-a mogle uzrokovati poremećenu proliferaciju stanica plućnog epitela. Isto tako, rezultati pokazuju da rhHsp70, LPS, LTA i CSE mogu aktivirati MAPK ovisno o vrsti stanica, koncentraciji te vremenu tretiranja. Nadalje, primijećeno je međudjelovanje rhHsp70 te LPS-a, LTA-a i CSE-a u modulaciji ekspresije mRNA za receptor TLR2. NHBE stanice pokazale su manju osjetljivost na primijenjena tretiranja u odnosu na 16HBE stanice.

KOPB, ekstrakt dima cigareta, Hsp70, MAPK, TLR2

nije evidentirano