hrvatski

Uloga protein-kinaza aktiviranih mitogenom i proteina toplinskog šoka u oksidacijskom stresu izazvanom ekstraktom dima cigareta kod A549 alveolarnih epitelnih stanica

Dim cigareta sadrži različite štetne komponente koje pridonose oštećenju tkiva i razvoju upale. Bitni regulatori stanične homeostaze, proteini toplinskog šoka (HSP), u stanici djeluju antiapoptotski, ali izlaskom iz stanice uslijed njenog oštećenja mogu potaknuti sintezu upalnih medijatora. Protein-kinaze aktivirane mitogenom (MAP-kinaze), aktivirane različitim izvanstaničnim podražajima, također doprinose razvoju upale i preživljenju. Cilj ovog istraživanja bio je ispitati uzrokuje li dim cigareta oksidacijski stres i djeluje li citotoksično na alveolarne epitelne stanice A549 putem promjena u aktivaciji MAP-kinaza i ekspresiji HSP-a. A549 stanice su bile tretirane 20% ekstraktom dima cigareta (CSE) tijekom 24 h uz i bez prisustva specifičnih inhibitora ERK-a (PD98059), p38 (SB202190) i HSP-a (KNK437). Koncentracija slobodnih tiolnih skupina proteina u stanicama te aktivnost laktat-dehidrogenaze (LDH) u mediju iznad stanica određene su spektrofotometrijski, dok su aktivacija MAP-kinaza (ERK i p38) i ekspresija HSP-a (HSP27, HSP32 i HSP70) ispitane Western blot analizom. Izlaganjem A549 stanica CSE-u došlo je do smanjenja koncentracije slobodnih tiolnih skupina proteina u stanicama (P < 0, 001) te povećane aktivnosti LDH (P < 0, 05) što je upućivalo na oksidacijsko oštećenje staničnih proteina i staničnu nekrozu. U prisustvu inhibitora p38 i HSP-a, aktivnost LDH se značajno smanjila u odnosu na 20% CSE (P ≤ 0, 001), ukazujući na ulogu p38 i HSP proteina u staničnoj smrti izazvanoj CSE-om. Nadalje, sami CSE doveo je do povećane aktivacije ERK-a, p38 i HSP32. Uz korištenje inhibitora HSP-a došlo je do aktivacije ERK-a i p38. Inhibicija ERK-a u kombinaciji s CSE-om dovela je do slabe aktivacije p38 i jakog porasta HSP32. Upotrebom inhibitora p38 u kombinaciji s CSE-om došlo je do snažne aktivacije ERK-a i porasta ekspresije HSP32. Možemo zaključiti da bi MAP-kinaze i HSP proteini mogli sudjelovati u upalnom odgovoru i apoptozi primijećenima kod bolesnika koji boluju od različitih bolesti povezanih s pušenjem, kao što je kronična opstrukcijska plućna bolest.

A549 stanice, CSE, HSP, MAPK

nije evidentirano