hrvatski

Ispitivanje stabilnosti glutationa u uzorcima plazme i krvi

Reducirani glutation (GSH) tripeptid je cisteina, glutaminske kiseline i glicina te predstavlja najvažniji neenzimatski antioksidans u organizmu. Cilj ovoga istraživanja bio je optimizirati metodu mjerenja GSH u ljudskoj krvi i plazmi te ispitati stabilnost GSH prilikom pohranjivanja uzoraka. Uzorci krvi i plazme pribavljeni su od dobrovoljnog davatelja krvi. Ispitivanje stabilnosti GSH provedeno je tako da je jedan uzorak podijeljen u četiri epruvete. U prvom uzorku plazme ili krvi koncentracija GSH izmjerena je odmah. Dio je uzoraka pohranjen u inkubatoru (na 37 °C u vlažnoj atmosferi s 5% CO2), a preostala po dva uzorka nakon sakupljanja pospremljeni su u zamrzivač na -20 °C na 8 i 30 dana. Koncentracija GSH izmjerena je pomoću Ellmanovog reagensa (5, 5'-ditiol-(2-nitrobenzojeva kiselina), DTNB), spektrofotometrijski pri valnoj duljini  = 412 nm i sobnoj temperaturi. Reakcija tiolne skupine GSH s DTNB-om odvija se na sobnoj temperaturi i pH = 7, 4 pri čemu nastaje žuti produkt 5'-tio-2-nitrobenzojeva kiselina (TNB). Mjerenja su provedena na UV-Vis spektrofotometru, a koncentracija GSH određena je pomoću molarnog apsorpcijskog koeficijenta (ε) koji iznosi 14, 15 x 10-3 M-1 cm-1. Ispitivanja su pokazala da je centrifugiranje plazme, prije spektrofotometrijskog određivanja GSH optimalno kako bi se uklonio dio interferencija koje bi mogle reagirati sa DTNB reagensom i odredila koncentracija GSH. Za određivanje koncentracije GSH u krvi potrebno je krv tretirati s 5 % klorovodičnom kiselinom kako bi se uklonile interferencije i omogućilo određivanje GSH. Nakon pohranjivanja uzorka krvi na 37 °C u vlažnoj atmosferi tijekom 24 sata uočen je statistički značajan porast koncentracije GSH i u plazmi i u krvi te se može zaključiti da su ovi uvjeti potakli sintezu GSH u krvnim stanicama. U uzorcima plazme i krvi pohranjenima -20°C tijekom 8 i 30 dana nisu uočene statistički značajne razlike u koncentraciji GSH. Stoga se može zaključiti da prilikom pohranjivanja uzoraka plazme i krvi na -20 °C do 30 dana ne dolazi do razgradnje GSH.

glutation, antioksidansi, oksidacijski stres, stabilnost GSH, DTNB, biološki uzorak

nije evidentirano