hrvatski

Određivanje količine proteina Cas3 u mutantima ∆hns i ∆htpG bakterije Escherichia coli u različitim uvjetima rasta

Sustav CRISPR-Cas je obrambeni mehanizam mnogih prokariota od infekcija stranim nukleinskim kiselinama poput virusa i plazmida. Lokus CRISPR sastoji se od niza palindromskih ponavljajućih sekvenci razdvojenih razmaknicama, podrijetlom iz faga ili plazmida. Uz lokus CRISPR nalaze se pridruženi geni cas, čijom ekspresijom nastaju proteini Cas koji sudjeluju u obrambenom mehanizmu. Lokus se prepisuje u dugu prekursorsku RNA koja se procesira u manje RNA zvane CRISPR-RNA (crRNA) koje se spajaju s jednim ili više proteina Cas. Taj kompleks pronalazi strane DNA temeljem komplementarnosti sekvenci, te nakon uspješnog prepoznavanja, nastaje R-omča. Tu strukturu prepoznaje protein Cas3 koji nakon vezanja cijepa stranu DNA. Nekoliko čimbenika utječe na aktivnost sustava CRISPR-Cas u bakteriji E. coli: temperatura, protein H-NS, te šaperon HtpG. Pri 37 0C uočen je gubitak aktivnosti proteina Cas3 iz nepoznatih razloga. U ovom radu istraživana je količina proteina Cas3 u sojevima uzgojenim pri temperaturi od 30 0C i 37 0C, te u sojevima s mutiranim genima hns, htpG ili oba. Analizom količine proteina Cas3 u različitim mutantama bakterije E. coli, nije uočena razlika u količini proteina Cas3 u ovisnosti o temperaturi rasta, već u ovisnosti o genotipu mutanta i to mutaciji hns.

CRISPR-Cas, Cas3, temperatura, E. coli

nije evidentirano