hrvatski

Konstrukcija plazmida koji omogućuje pojačanu ekspresiju konstitutivno aktivnog alela YAP1C620F

Zbog složene kemijske strukture, kvasac ne može fermentirati lignocelulozne sirovine te ih je potrebno hidrolizirati, no pri hidrolizi se uz fermentabilne šećere oslobađaju i inhibitori rasta (slabe kiseline i derivati furana). Cilj ovog rada bio je uvesti točkastu mutaciju C620F u gen YAP1 čijom translacijom nastaje konstitutivno aktivan oblik transkripcijskog faktora Yap1 koji uzrokuje povećanu otpornost stanica kvasca na visoke koncentracije furfurala i hidroksimetilfurfurala. Mutacija je uvedena u gen YAP1 na plazmidu pSP-YAP1 u dva koraka. Tijekom lančane reakcije polimerazom sintetizirana je linearna plazmidna DNA koja sadrži točkastu mutaciju u genu YAP1. Linearni produkt je potom tretiran smjesom enzima KLD koja se sastoji od kinaze, ligaze i DpnI te je transformirana bakterija E. coli elektroporacijom. Iz transformiranih bakterijskih stanica izolirana je plazmidna DNA te je restrikcijskom analizom i sekvenciranjem potvrđeno uspješno uvođenje točkaste mutacije i konstrukcija plazmida pSP-YAP1C620F.

alel YAP1C620F, gen YAP1, kvasac Saccharomyces cerevisiae, mutageneza, točkasta mutacija

nije evidentirano