hrvatski

Vektorski sustav za stabilnu genomsku ugradnju ekspresijske kazete transpozazama

DNA transpozoni su pokretni genetiĉki elementi koji sadrže gen koji kodira enzim transpozazu omeĊen terminalnim sljedovima IR (eng. inverted repeats). Transpozaza veže terminalne sljedove IR i katalizira transpoziciju omeĊenog gena, što omogućuje pokretanje DNA transpozona. Na temelju mehanizma transpozicije DNA transpozona izvedeni su sintetiĉki vektorski sustavi za prijenos gena kod kojih je slijed od interesa na plazmidu omeĊen terminalnim sljedovima IR dok je transpozaza eksprimirana in trans. Ovakvi sustavi omogućuju ugradnju ekspresijske kazete u genom animalnih stanica te nude alternativu dosadašnjim viralnim i neviralnim metodama prijenosa gena. Kako bi se omogućila dugotrajna ekspresija transgena u vektore se dodaju izolatori, regulatorni sljedovi DNA koji stvaranjem kromatinskih barijera štite transgene od utišavanja. Cilj ovog istraživanja je bio izrada vektorskog sustava zasnovanog na tehnologiji transpozona koji će omogućiti stabilnu ugradnju i dugotrajnu ekspresiju transgena u genomu domaćina. Uspješno su izraĊena dva plazmidna vektorska sustava zasnovana na DNA transpozonima sleeping beauty (SB) odnosno piggyBac (PB). Metodama restrikcije i ligacije su u svaki plazmid ugraĊena dva terminalna slijeda IR SB odnosno dva terminalna slijeda IR PB te po ĉetiri izolatorska slijeda. Istim metodama je izraĊen ekspresijski vektor za ekspresiju transpozaze PB in trans. Ispravnost svih plazmidnih konstrukata je potvrĊena metodom restrikcijske analize ili metodom analize kolonija putem PCR reakcije te sekvenciranjem.

transpozon ; vektor ; sleeping beauty ; piggyBac ; izolator

nije evidentirano