Pretražite po imenu i prezimenu autora, mentora, urednika, prevoditelja

Napredna pretraga

Pregled bibliografske jedinice broj: 1006554

Konstrukcija vektora za istovremenu ekspresiju teškog i lakog lanca imunoglobulina G u staničnoj liniji HEK293 Freestyle


Bošković, Maria
Konstrukcija vektora za istovremenu ekspresiju teškog i lakog lanca imunoglobulina G u staničnoj liniji HEK293 Freestyle, 2017., diplomski rad, diplomski, Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb


CROSBI ID: 1006554 Za ispravke kontaktirajte CROSBI podršku putem web obrasca

Naslov
Konstrukcija vektora za istovremenu ekspresiju teškog i lakog lanca imunoglobulina G u staničnoj liniji HEK293 Freestyle
(Constructionof a vector for simultaneous expression of immunoglobin G heavy and light chain in HEK293 Freestyle cell line)

Autori
Bošković, Maria

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
05.10

Godina
2017

Stranica
49

Mentor
Vojta, Aleksandar

Ključne riječi
imunoglobulin G (IgG) ; teški i laki lanac ; glikozilacija ; T2A peptid ; HEK293 Freestyle ; ekspresija
(immunoglobulin G (IgG) ; heavy and light chain ; glycosylation ; T2A peptide ; HEK293 Freestyle ; expression)

Sažetak
Imunoglobulin G (IgG) se sastoji od lakog i teškog lanca. Njihova posttranslacijska obrada uključuje N-glikozilaciju na Fc dijelu. Glikozilacija ima važnu ulogu u modulaciji efektorske funkcije IgG-a. Za ispitivanje glikozilacijskog profila IgG-a te za njegovu manipulaciju (glikoinženjerstvo) koristi se model stanične linije HEK 293 Freestyle. Te stanice rastu u suspenziji, lako se transfeciraju i izlučuju IgG u medij ako su u njih ubačeni vektori za ekspresiju teškog i lakog lanca IgG-a. Ovaj model omogućava istraživanje glikozilacije IgG-a kotransfekcijom vektora za ekspresiju lanaca IgG-a i molekularnih alata koji utječu na regulaciju glikozilacije, kao što su aktivatori ili represori transkripcije bazirani na CRISPR- Cas9 sustavu. Cilj ovog istraživanja je metodama genetičkog inženjerstva konstruirati vektore za istovremenu ekspresiju teškog i lakog lanca IgG-a primjenom dva različita pristupa dizajnu ekspresijskog vektora. Prvi pristup temelji se na bicistronskoj ekspresiji teškog i lakog lanca IgG-a povezanih samocijepajućim peptidom T2A, dok će drugi konstrukt sadržavati dvije ekspresijske kazete (za teški i laki lanac) pod zasebnim promotorima. Nakon transfekcije HEK293 Freestyle stanica konstrukti će se usporediti dot blot metodom s obzirom na količinu izlučenog IgG-a. Uspješno su dobiveni konstrukti sa samocijepajućim peptidom T2A , koji je ubačen u bakterijski soj E. coli XL10- Gold u svrhu kloniranja plazmidnih konstrukata. Plazmidni konstrukti uspješno su transfecirali staničnu liniju HEK293 Freestyle. Stanični supernatant je skupljen treći i peti dan te je semikvantitativno uspoređena količina izlučenog IgG-a pomoću metode dot blot. Konstukti s dvije ekspresijske kazete (za teški i laki lanac) pod zasebnim promotorima nije dobiven. Mogući razlog je velika zastupljenost ponavljajućih sljedova zbog čega je bila povećana učestalost rekombinacije u E. coli XL10-Gold.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija



POVEZANOST RADA


Ustanove:
Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb

Profili:

Avatar Url Aleksandar Vojta (mentor)

Avatar Url Maria Bošković (autor)

Poveznice na cjeloviti tekst rada:

zir.nsk.hr

Citiraj ovu publikaciju:

Bošković, Maria
Konstrukcija vektora za istovremenu ekspresiju teškog i lakog lanca imunoglobulina G u staničnoj liniji HEK293 Freestyle, 2017., diplomski rad, diplomski, Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb
Bošković, M. (2017) 'Konstrukcija vektora za istovremenu ekspresiju teškog i lakog lanca imunoglobulina G u staničnoj liniji HEK293 Freestyle', diplomski rad, diplomski, Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb.
@phdthesis{phdthesis, author = {Bo\v{s}kovi\'{c}, Maria}, year = {2017}, pages = {49}, keywords = {imunoglobulin G (IgG), te\v{s}ki i laki lanac, glikozilacija, T2A peptid, HEK293 Freestyle, ekspresija}, title = {Konstrukcija vektora za istovremenu ekspresiju te\v{s}kog i lakog lanca imunoglobulina G u stani\v{c}noj liniji HEK293 Freestyle}, keyword = {imunoglobulin G (IgG), te\v{s}ki i laki lanac, glikozilacija, T2A peptid, HEK293 Freestyle, ekspresija}, publisherplace = {Zagreb} }
@phdthesis{phdthesis, author = {Bo\v{s}kovi\'{c}, Maria}, year = {2017}, pages = {49}, keywords = {immunoglobulin G (IgG), heavy and light chain, glycosylation, T2A peptide, HEK293 Freestyle, expression}, title = {Constructionof a vector for simultaneous expression of immunoglobin G heavy and light chain in HEK293 Freestyle cell line}, keyword = {immunoglobulin G (IgG), heavy and light chain, glycosylation, T2A peptide, HEK293 Freestyle, expression}, publisherplace = {Zagreb} }




Contrast
Increase Font
Decrease Font
Dyslexic Font